在高效液相色譜(HPLC)分析中，當分析芳香族化合物位置異構(gòu)體時，若使用常規(guī) C18色譜柱通常難以有效分離，此時改用五氟苯基柱(PFP柱)是一種有效策略。PFP柱憑借其特殊的選擇性已成為眾多分析工作者的得力助手。本文將全面解析PFP柱的優(yōu)勢及應(yīng)用場景的案例，帶您深入了解這款"氟"凡的色譜分離利器。

五氟苯基柱優(yōu)勢

五氟苯基柱是一種在硅膠基質(zhì)表面鍵合五氟苯基(C₆F₅)或五氟苯乙基固定相的特殊色譜柱。在分離芳香族位置異構(gòu)體時，五氟苯基（PFP）固定相的偶極-偶極相互作用是其區(qū)別于C18柱的核心優(yōu)勢之一。這種作用力能夠敏銳地區(qū)分取代基位置差異導(dǎo)致的分子極性分布變化，從而解決常規(guī)反相色譜難以分離的問題。

下面跟隨小編一起看一下五氟苯基柱的幾個應(yīng)用場景吧！

應(yīng)用場景-芳香族位置異構(gòu)體的分離

案例一

在2-萘磺酸樣品檢測過程中，我們發(fā)現(xiàn)使用普通C18色譜柱無法分開樣品中的1, 5-萘二磺酸與2, 6-萘二磺酸，分析結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)兩者均為萘環(huán)二磺酸位置異構(gòu)體，極性相近，普通C18主要依賴疏水相互作用，對芳香族位置異構(gòu)體的選擇性差異是有限的。

1, 5-萘二磺酸                                                   2, 6-萘二磺酸

在不改變流動相的前提下，將色譜柱更換為Alphasil S-PFP，由于五氟苯基柱可以提供偶極-偶極等作用機制，對于1, 5-萘二磺酸與2, 6-萘二磺酸這種芳香位置異構(gòu)體，可以提供不一樣的選擇性，分離效果更好。

（1: 1, 5-萘二磺酸；2: 2, 6-萘二磺酸；3: 2, 7-萘二磺酸；4: 1-萘磺酸；5: 2-萘磺酸）

案例二

類似的案例，進行國標檢測時也會遇到，例如GB 5009.82-2016 《食品安全國家標準 食品中維生素A、D、E的測定》中，維生素E的四種異構(gòu)體（α-、β-、γ-、δ-生育酚）也屬于芳香族位置異構(gòu)體，其中β-生育酚和γ-生育酚由于結(jié)構(gòu)相似（甲基取代位置不同），在普通 C18色譜柱上難以分離，通常會出現(xiàn)共流出現(xiàn)象。在 GB 5009.82-2016 中，第一法（反相高效液相色譜法） 明確提到可以使用PFP柱進行維生素E異構(gòu)體的分離。

如下圖所示，使用Alphasil S-PFP進行4種維生素E異構(gòu)體檢測也可以獲得良好的分離。

4種維生素E異構(gòu)體的檢測（Alphasil S-PFP）

應(yīng)用指南-流動相的選擇，乙腈or甲醇？

主成分                                              雜質(zhì)

為了分離某化藥中的主成分與雜質(zhì)，采用乙腈/水體系作為流動相并嘗試了多款C18色譜柱，結(jié)果均無法達到令人滿意的效果。

通過查詢結(jié)構(gòu)可知，二者互為芳香族位置異構(gòu)體，所以PFP柱是分離該類化合物的理想選擇。但實際結(jié)果中PFP柱的分離反而更差，這是什么原因？

C18和PFP色譜柱的分離結(jié)果對比圖

（流動相：乙腈/水）

原來當乙腈作為流動相時，由于乙腈結(jié)構(gòu)中含有不飽和碳氮三鍵，大量的乙腈分子會包圍同分異構(gòu)體，從而干擾固定相和被分析物之間的相互作用，導(dǎo)致PFP柱分離能力嚴重下降。

當我們把乙腈更換為甲醇后，甲醇的羥基與PFP固定相的氟原子形成互補作用，可增強對位置異構(gòu)體的區(qū)分。結(jié)果主成分與雜質(zhì)的分離度達到了3以上，遠遠滿足了檢測需求。

PFP色譜柱的分離結(jié)果

（流動相：甲醇/水）

結(jié)論：PFP柱—破解芳香異構(gòu)體分離難題的“偶極密鑰”

當C18柱在芳香族位置異構(gòu)體面前“束手無策”時，五氟苯基（PFP）色譜柱憑借其特殊的“偶極魔法”，成為分離難題的理想解決方案。選擇PFP柱，不僅是更換固定相，更是解鎖芳香異構(gòu)體分離的全新維度！

但要注意的是，當選擇PFP柱分離芳香族位置異構(gòu)體類樣品時，采用甲醇作為流動相體系，才能精準激發(fā)PFP柱的分離潛力。

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“你在異構(gòu)體分離中用過PFP柱嗎？歡迎留言分享案例！”